Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題

（一）人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發(fā)酵處理秸稈，提高秸稈的營養(yǎng)價值。為了增強發(fā)酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究

（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是_________（填序號）

①酒精燈 ②培養(yǎng)皿 ③顯微鏡 ④無菌水

（2）在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是______________________。

（3）向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的原因是____________________。

（4）剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落（見圖）。圖中降解圈大小與纖維素酶的_____________有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強的菌株是_________（填圖中序號）

（5）分離得到的纖維素酶高產(chǎn)菌 株若進行擴大培養(yǎng)需在_________條件下，用_________ (工具)完成接種。

（二）請回答關(guān)于葡萄酒生產(chǎn)和檢測方面的問題

（1）各大酒莊釀制葡萄酒時，為保持各產(chǎn)區(qū)葡萄酒的特有口感，發(fā)酵菌種主要來自附在葡萄皮上的_________。該菌種在學生實驗中也被頻繁使用。實驗室在保存該菌種時，通常將該菌種接種到_________培養(yǎng)基上，再放入冰箱中冷藏。

（2）某實驗小組釀制的葡萄酒有一股酸味，從發(fā)酵條件分析，可能原因是_________導致醋桿菌大量生長產(chǎn)生醋酸，其反應(yīng)式為__________________。

（3）該實驗小組為研究過濾、沉淀后葡萄酒中的活菌數(shù)，檢測流程如下所示。

取樣→稀釋→接種→培養(yǎng)→計數(shù)→統(tǒng)計→報告

①檢測過程中，應(yīng)將不同稀釋度的樣液用_________法分別接種于若干組平面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24～48小時出現(xiàn)_________后計數(shù)。

②下列關(guān)于檢測流程的敘述中，正確的是_________

A．配制培養(yǎng)基時應(yīng)在調(diào)節(jié)酸堿度以前滅菌

B．為防止外來微生物污染，應(yīng)將培養(yǎng)皿倒置在超凈臺上培養(yǎng)

C．根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果，只需統(tǒng)計適宜稀釋度樣液組的菌落數(shù)

D．理論上，統(tǒng)計分析結(jié)果會略高于實際活菌數(shù)

Answer 1

【答案】③ 培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果 避免培養(yǎng)基污染棉塞 量與活性 ① 無菌 接種環(huán) （野生）酵母菌 斜面 有氧條件∕有氧環(huán)境 略 涂布（ 分離） （單）菌落 C

【解析】

微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是無菌操作．微生物培養(yǎng)過程中除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮pH、溫度和滲透壓等條件，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行消毒．可以通過稀釋涂布平板法或顯微鏡計數(shù)法進行統(tǒng)計計數(shù)。

剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。剛果紅可以在細菌菌落形成前倒平板時加入，也可以在菌落形成后加入，若在細菌菌落形成前倒平板時加入剛果紅，則所加剛果紅要進行滅菌，以防雜菌的侵入，影響纖維素分解菌菌落的形成；若在菌落形成后加入剛果紅，則不需要滅菌。

（一）

（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，需要使用酒精燈對接種環(huán)進行滅菌，對培養(yǎng)皿進行滅菌，用無菌水稀釋菌液，故選③。

（2）在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量過多會在培養(yǎng)基表面出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果，所以不能過多。

（3）分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈以防雜菌污染，避免培養(yǎng)基污染棉塞。

（4）在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落，降解圈大小與纖維素酶的多少和活性有關(guān)；纖維素酶的量越多，活性越強，分解的纖維素越多，透明降解圈越大，所以圖中降解纖維素能力最強的菌株是①。

（5）分離得到的纖維素酶高產(chǎn)菌株，在固體培養(yǎng)基上，故進行擴大培養(yǎng)需在無菌條件下，用接種環(huán) (工具)完成接種。

（二）

（1）為保持各產(chǎn)區(qū)葡萄酒的特有口感，可利用附在葡萄皮上的(野生)酵母菌作為菌種進行發(fā)酵；要保存菌種，可先將要保存的菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下配以，當菌落長成后，將試管放入4℃的冰箱中冷藏保存。

（2）某實驗小組釀制的葡萄酒有一股酸味，從發(fā)酵條件分析，可能原因是有氧條件導致醋酸菌大量生長產(chǎn)生醋酸。其反應(yīng)式為C6H12O62C2H5OH + 2CO2 + 少量能量。

（3）①常用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。在檢測過程中，應(yīng)將不同稀釋度的樣液用涂布分離法分別接種于若干組平面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24-48小時出現(xiàn)(單)菌落后計數(shù)。

②培養(yǎng)基的pH值(酸堿度)直接影響培養(yǎng)物對離子的吸收，配制培養(yǎng)基時應(yīng)在調(diào)節(jié)酸堿度以后滅菌，A項錯誤；倒置培養(yǎng)，一方面可防止凝結(jié)在皿蓋上的水蒸流到培養(yǎng)基表面導致染菌，另一方面有利于菌種利用培養(yǎng)基營養(yǎng)，加快生長速度。但不是將培養(yǎng)皿直接倒置在超凈臺上，而是培養(yǎng)皿的蓋子朝下,帶培養(yǎng)基的底朝上，B項錯誤；當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約有多少個活菌，因此，可根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果，只需統(tǒng)計適宜稀釋度樣液組的菌落數(shù)即可，C項正確；當兩個或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此理論上，統(tǒng)計分析結(jié)果會比實際活菌數(shù)目低，D項錯誤；故選C。