Question

14．自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的．人們?cè)谘芯课⑸�物時(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定．下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題．
步驟：①制備稀釋倍數(shù)為10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀釋液．②用稀釋涂布平板法接種樣品．③適宜溫度下培養(yǎng)．結(jié)果分析：
（1）測(cè)定的大腸桿菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是D．
A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是23
B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是22和26，取平均值24
C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26
D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、30、24和25，取平均值25
（2）一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2mL）1.17×10⁸．
（3）用這種方法測(cè)定密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量多，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落．
（4）某同學(xué)在測(cè)定大腸桿菌的密度時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該大腸桿菌的品系被污染了？為什么？不能 因?yàn)殡s菌可能來(lái)自培養(yǎng)基或來(lái)自培養(yǎng)過(guò)程．

Answer 1

分析 1、平板劃線法是接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的造作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，在數(shù)次劃線之后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體-菌落；稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)獲得由單細(xì)胞繁殖而來(lái)的菌落．
2、對(duì)微生物進(jìn)行分離、計(jì)數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，往往選取30～300的平板，取至少三個(gè)平板的平均值，每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)；由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)平板上觀察的是一個(gè)菌落，因此估算的菌落數(shù)少于實(shí)際菌落數(shù)．
3、微生物培養(yǎng)過(guò)程中要嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作．

解答 解：（1）在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10的培養(yǎng)基中，分析選項(xiàng)可知，D選項(xiàng)中四個(gè)平板的每個(gè)平板的菌落數(shù)在30～300之間，且非常接近，因此D選項(xiàng)的結(jié)果最可靠．
（2）每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)是=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)=（23.4÷0.2）×10⁶=1.17×10⁸個(gè)．
（3）由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)平板上觀察的是一個(gè)菌落，因此實(shí)際菌落數(shù)多于估算的菌落數(shù)．
（4）某同學(xué)在測(cè)定大腸桿菌的密度時(shí)發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，不能確定大腸桿菌品系被污染，也可能是培養(yǎng)基被污染或接種過(guò)程沒(méi)有嚴(yán)格按照無(wú)菌技術(shù)進(jìn)行操作或培養(yǎng)過(guò)程污染．
故答案為：
（1）D　    
（2）1.17×10⁸
（3）多　當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落
（4）不能      因?yàn)殡s菌可能來(lái)自培養(yǎng)基或來(lái)自培養(yǎng)過(guò)程

點(diǎn)評(píng) 本題的知識(shí)點(diǎn)是微生物培養(yǎng)過(guò)程，分離微生物和統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)常用的常用方法，主要考查學(xué)生設(shè)計(jì)和完善實(shí)驗(yàn)步驟，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果獲取結(jié)論的能力和提出問(wèn)題進(jìn)行進(jìn)一步探究的能力，利用所學(xué)的微生物知識(shí)解決生活問(wèn)題的能力．