Question

【題目】科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如下圖：

（1）步驟①的技術(shù)名稱是 。

（2）將基因?qū)��?/span>ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因?yàn)?/span>ES細(xì)胞具有 。

（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有干擾素基因的 。由于DNA復(fù)制時，子鏈只能由5′向3′方向延伸，故構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時，可以從下圖A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取 作為引物。對干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時，可選用限制酶的組合為 或 。

（4）將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā) 色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)。為檢測干擾素基因是否表達(dá)，可以采用 的方法。

Answer 1

【答案】（1）核移植 （2）發(fā)育的全能性 （3）基因表達(dá)載體 B和C HindⅢ和PstⅠ EcoRⅠ和Pst Ⅰ

（4）綠 抗原一抗體雜交

【解析】（1）核移植是將體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，所以實(shí)驗(yàn)前要去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．

（2）將基因?qū)��?/span>ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因?yàn)?/span>ES細(xì)胞具有全能性．

（3）步驟③是將目的基因?qū)��?/span>ES細(xì)胞，該過程之前需要構(gòu)建基因表達(dá)載體；DNA復(fù)制只能從5’到3’，因此構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時，可以從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物．由圖可知，SamⅠ酶的識別序列和切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因，因此對干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時，可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．

（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時會破壞紅色熒光蛋白基因，但不會破壞綠色熒光蛋白基因，因此將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)．為檢測干擾素基因是否表達(dá)，可以采用抗原-抗體雜交法