Question

6．淀粉分解菌是能分解淀粉的一類微生物，在自然條件下，淀粉分解菌和其他各種細(xì)菌混雜生活在土壤中．某實(shí)驗(yàn)小組利用培養(yǎng)基將土壤中的淀粉分解菌篩選出來，回答下列問題：
（1）將土壤中的淀粉分解菌篩選出來的培養(yǎng)基應(yīng)添加淀粉作為唯一的碳源．若要配制為固體培養(yǎng)基，還要加入瓊脂作為凝固劑．
（2）在淀粉分解菌的培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒（消毒、滅菌）．
（3）稀釋涂布平板法可用于微生物的接種和計(jì)數(shù)，該實(shí)驗(yàn)小組將樣液分別稀釋了10倍、10²  倍、10³ 倍、10⁴ 倍，然后將10² 倍、10³ 倍、10⁴倍的稀釋液分別涂布在不同的平板上．若有三個(gè)平板均涂布了稀釋倍數(shù)為10³ 倍的稀釋液1 mL，分別形成了 68、70和72個(gè)菌落，則樣液中每毫升含有淀粉分解菌7×10⁴個(gè)，該方法測(cè)量值一般比實(shí)際值�。ǖ�、少）．
（4）涂布一段時(shí)間后，待長(zhǎng)出菌落后可向培養(yǎng)基中滴入碘液，菌落周圍出現(xiàn)透明圈的，就是目的菌株．
（5）根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)分析，要減少平板菌落計(jì)數(shù)產(chǎn)生的誤差，可采取什么措施（答出一項(xiàng)即可）？

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成
①各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽；
②不同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．
2、檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)，可以看出采用的計(jì)數(shù)方法是稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)．用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，在每一個(gè)梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求其平均值，再通過計(jì)算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)．

解答 解：（1）要將土壤中的淀粉分解菌篩選出來，培養(yǎng)基應(yīng)添加淀粉作為唯一的碳源．若要配制為固體培養(yǎng)基，還要加入瓊脂作為凝固劑．
（2）為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒．
（3）涂布多個(gè)稀釋倍數(shù)的稀釋液的目的是稀釋平板法培養(yǎng)出微生物的單個(gè)菌落，達(dá)到純培養(yǎng)的目的．由題意知1ml原樣液中的菌落數(shù)是$\frac{68+70+72}{3}$×10³=7×10⁴個(gè)．稀釋涂布平板得到的菌落可能存在兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌細(xì)胞長(zhǎng)成一個(gè)菌落，使該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要低．
（4）碘液可以鑒定淀粉產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng)，涂布一段時(shí)間后，待長(zhǎng)出菌落后可向培養(yǎng)基中滴入碘液，菌落周圍出現(xiàn)透明圈的，說明淀粉被分解，則該菌落就是目的菌株．
（5）要減少平板菌落計(jì)數(shù)產(chǎn)生的誤差，至少涂布3個(gè)平板，作為重復(fù)組（設(shè)置重復(fù)組）；樣品的稀釋倍數(shù)要合適（選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)）；設(shè)置不接種的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，確認(rèn)培養(yǎng)基不受污染．
故答案為：
（1）淀粉         瓊脂 
（2）滅菌        消毒 
（3）7×10⁴         �。ǖ�、少）
（4）透明圈  
（5）至少涂布3個(gè)平板，作為重復(fù)組（設(shè)置重復(fù)組）；樣品的稀釋倍數(shù)要合適（選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)）；設(shè)置不接種的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，確認(rèn)培養(yǎng)基不受污染

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的成分以及制備方法，識(shí)記無菌技術(shù)的主要內(nèi)容，掌握微生物分離與計(jì)數(shù)的方法等，同時(shí)要求考生具有一定的實(shí)驗(yàn)技能．