Question

19．下列是有關(guān)血紅蛋白提取和分離的相關(guān)操作，其中不正確的是（　�。�

• A． 血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液
• B． 用生理鹽水重復(fù)洗滌紅細(xì)胞
• C． 血紅蛋白釋放后應(yīng)低速短時(shí)間離心
• D． 不斷用磷酸緩沖液處理的目的是讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的PH范圍內(nèi)，以維持其結(jié)構(gòu)和功能

Answer 1

分析 血紅蛋白提取和分離實(shí)驗(yàn)
1、原理：凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離．
2、用磷酸緩沖液處理的目的是讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其結(jié)構(gòu)和功能．
3、分離血紅蛋白溶液時(shí)，將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到離心管中，經(jīng)過中速長(zhǎng)時(shí)離心后，可明顯看到試管中溶液分為4層，從上往下數(shù)，第1層為甲苯層，第2層為脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層為血紅蛋白水溶液，第4層為雜質(zhì)沉淀層．
4、氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果．
5、血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白溶液，④透析．（2）凝膠色譜操作：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)．（3）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳．
6、電泳法是利用待測(cè)樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異和分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離或鑒定．

解答 解：A、血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液，A正確；
B、洗滌紅細(xì)胞時(shí)，應(yīng)該用等滲溶液，即用生理鹽水重復(fù)洗滌紅細(xì)胞，B正確；
C、血紅蛋白釋放后應(yīng)中速長(zhǎng)時(shí)間離心，C錯(cuò)誤；
D、不斷用磷酸緩沖液處理的目的是讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的PH范圍內(nèi)，以維持其結(jié)構(gòu)和功能，D正確．
故選：C．

點(diǎn)評(píng) 本題考查蛋白質(zhì)的提取和分離，對(duì)于此類試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)采用的方法等，要求考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過程中注意積累．