Question

科學(xué)家將魚(yú)抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對(duì)寒冷的環(huán)境中生長(zhǎng)。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點(diǎn)，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過(guò)程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①—④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過(guò)程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)例中，應(yīng)該選用限制酶                   分別對(duì)             進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為              種。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會(huì)抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚(yú)的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有            作為標(biāo)記基因。

（3）研究人員通常采用         法將魚(yú)抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用       技術(shù)，在分子水平檢測(cè)目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚(yú)的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中番茄組織細(xì)胞的                過(guò)程。

Answer 1

含PstⅠ、SmaⅠ魚(yú)抗凍蛋白基因的DNA、質(zhì)粒（2分）4、2（2分）

（2）抗氨節(jié)青霉素基因（ampr）

（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（或基因槍法等，答案合理即給分）抗原—抗體雜交

（4）脫分化、再分化