Question

（8分）下圖表示血紅蛋白提取和分離實驗的部分裝置或操作方法，請回答下列問題：

（1）如圖甲，表示            過程，該操作目的是去除樣品中            的雜質(zhì)。現(xiàn)有一定量的血紅蛋白溶液，進行上述操作時若要盡快達到理想的實驗效果，可以                                 （寫出一種方法）。

（2）如圖乙，往色譜柱中加樣的正確操作順序是         （用序號表示）。在進行④操作前，應(yīng)該等樣品               ，且要         （填“打開”或“關(guān)閉”）下端出口。

（3）a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是       ，原因是          

 

Answer 1

【答案】

 

（1）透析（粗分離）    分子量較小    增加緩沖液的量或及時更換緩沖液

（2）②③④①    完全進入凝膠層    關(guān)閉

⑶a　a相對分子質(zhì)量較大，無法進入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快

【解析】分離蛋白質(zhì)的流程圖為樣品處理，粗分離即為透析，純化凝膠色譜，統(tǒng)一計劃鑒定，離心血液會使血細胞和血漿中的蛋白質(zhì)分開。在使蛋白質(zhì)釋放的過程上，除使用蒸餾水外，還應(yīng)加入甲苯。提取的成為為血紅蛋白，一般呈現(xiàn)紅色；增加緩沖液的量或及時更換緩沖液快速達到理想效果，往色譜柱中加樣的操作順序為裝好的色譜柱至少要用相當(dāng)于3倍保留體積的洗脫劑平衡，待洗脫劑流至與凝膠柱液面相平時（不能流干，否則會帶入氣泡），用滴管吸取樣品溶液，在高于凝膠表面約1cm處，沿管壁四周緩緩滴加樣品液，加完后打開下面的出口，使樣品滲入凝膠內(nèi)。再關(guān)閉出口，用少量洗脫液將管壁殘留的樣品洗下，再打開出口，至溶液滲入柱內(nèi)，再關(guān)閉出口�？梢钥紤]再加一層薄薄的脫脂棉以保護柱表面（我一般不加），然后即可進行洗脫。所以為②③④①，用凝膠色譜技術(shù)分離各種大分子物質(zhì)時，大分子物質(zhì)先洗脫出來，然后是小分子物質(zhì)。大分子物質(zhì)由于直徑較大，不易進入凝膠顆粒的微孔，而只能分布于顆粒之間，所以向下移動的速度較快。小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外，還可以進入凝膠顆粒的微孔，即進入凝膠內(nèi)，在向下移動的過程中，從一個凝膠顆粒內(nèi)擴散到顆粒間隙后再進入另一凝膠顆粒，如此不斷地進入和擴散，小分子物質(zhì)的下移速度落后于大分子物質(zhì)從而落后于大分子物質(zhì)洗脫出來。在色譜柱中裝填凝膠的時候要盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。一是在裝填凝膠柱時，不得有氣泡存在，因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。二是凝膠色譜操作過程中，不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。