Question

8．抗凝血酶Ⅲ蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于血液性疾病的治療．下圖為培育轉(zhuǎn)基因奶牛獲得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程．回答問題：

（1）已知抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的堿基對序列，獲得目的基因的方法是以從基因文庫中獲取或利用PCR技術(shù)擴增，擴增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因經(jīng)常采用PCR技術(shù)技術(shù)．構(gòu)建基因表達載體所用的工具酶有限制酶、DNA連接酶．
（2）過程①是將目的基因?qū)�入受體細胞，該過程常用的方法是顯微注射法．選擇受精卵作為目的基因的受體細胞的主要原因是受精卵的全能性最高；過程②包括早期胚胎培養(yǎng)（或“動物細胞培養(yǎng)”） 技術(shù)和胚胎移植技術(shù)；可用
胚胎分割技術(shù)獲得多只與該轉(zhuǎn)基因奶牛遺傳物質(zhì)相同的牛犢．
（3）對胚胎進行分割移植時，胚胎應(yīng)發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段．胚胎在受體內(nèi)存活的原因，可能是受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)．對受體動物的處理是用促性腺激素對受體進行同期發(fā)情處理．
（4）若要檢測牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（5）如果檢測發(fā)現(xiàn)抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被導(dǎo)入了受精卵，但卻沒有檢測到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那應(yīng)該考慮分別位于目的基因首端和端的啟動子和終止子沒有設(shè)計好，應(yīng)從這方面考慮改善．

Answer 1

分析 獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取：②利用PCR技術(shù)擴增：③人工合成：這種方法有兩條途徑，一是以目的基因轉(zhuǎn)錄的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DNA，再在酶的作用下合成雙鏈DNA，即目的基因；另一條途徑是蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出信使RNA序列，再推測出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，然后用化學(xué)的方法以單核苷酸為原料合成．

解答 解：（1）已知抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的堿基對序列，可以從基因文庫中獲取或利用PCR技術(shù)擴增獲取目的基因，利用PCR技術(shù)能在體外大量擴增目的基因（抗凝血酶Ⅲ蛋白基因）．基因表達載體的構(gòu)建過程，該過程需要限制酶切割目的基因和運載體，DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組質(zhì)粒．
（2）過程①是將目的基因?qū)�入受體細胞，常用的方法是顯微注射法．利用PCR技術(shù)能擴增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因．過程②是受精卵需要經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)，可用胚胎分割技術(shù)獲得多只與該轉(zhuǎn)基因奶牛遺傳物質(zhì)相同的牛犢．
（3）胚胎移植時，受體應(yīng)處于適合的生理狀況，此時可利用促性腺激素對受體進行同期發(fā)情處理．此外，受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能．一般等到胚胎發(fā)育到桑葚胚或囊胚時，進行胚胎移植．
（4）若要檢測牛奶中是否含有人血清白蛋白，這屬于翻譯水平的檢測，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（5）基因表達載體由啟動子、終止子、標記基因和目的基因組成．啟動子位于首端，終止子位于尾端．
故答案為：
（1）以從基因文庫中獲取或利用PCR技術(shù)擴增    PCR技術(shù)    限制酶  DNA連接酶
（2）將目的基因?qū)�入受體細胞   顯微注射法  受精卵的全能性最高  早期胚胎培養(yǎng)（或“動物細胞培養(yǎng)”）  胚胎分割
（3）桑葚胚或囊胚     免疫排斥反應(yīng)   促性腺激素對受體
（4）抗原-抗體雜交
（5）啟動子和終止子

點評 本題考查基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)；識記胚胎移植的基本程序和胚胎分割技術(shù)的特點，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題．