Question

【題目】養(yǎng)殖貝類的一類養(yǎng)殖水域的要求是每100mL海水中的大腸桿菌含量應(yīng)小于1.4×101個(gè)。某實(shí)驗(yàn)小組欲檢測養(yǎng)殖貝類的海水中大腸桿菌的含量。具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：

第一步：配制培養(yǎng)基；

第二步：制作無菌平板；

第三步：將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算各組平板上菌落的平均數(shù)。

請(qǐng)回答下列問題：

（1）該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不完善，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)步驟不完善處補(bǔ)充完整：__________。

（2）在配制培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基中應(yīng)含有大腸桿菌所需的碳源、氮源、______和______等營養(yǎng)物質(zhì)，還需要在培養(yǎng)基中添加瓊脂，目的是______，配制好的培養(yǎng)基常用的滅菌方法是______。

（3）在接種海水時(shí)，用到的工具是______（填“接種環(huán)”或“涂布器”），最后統(tǒng)計(jì)的大腸桿菌菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是_________________。在計(jì)算活菌數(shù)目時(shí)，除該實(shí)驗(yàn)中用到的方法外，還可采用的方法是______。

Answer 1

【答案】第二步之后應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組接種適量無菌水，實(shí)驗(yàn)組接種等量海水 水 無機(jī)鹽 使培養(yǎng)基在常規(guī)培養(yǎng)條件下呈固態(tài) 高壓蒸汽滅菌法 涂布器 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，在平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

【解析】

1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對(duì)pH

、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。對(duì)異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時(shí)并不是起單一方面的作用。

2、兩種純化細(xì)菌的方法的比較

	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)	適用范圍
平板劃線分離法	可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離	不能計(jì)數(shù)	適用于好氧菌
稀釋涂布平板法	可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征	吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延	適用于厭氧，兼性厭氧菌

3、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對(duì)象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

（1）該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不完善，應(yīng)在第二步之后設(shè)置空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組接種適量無菌水，實(shí)驗(yàn)組接種等量海水。

（2）在配制培養(yǎng)基時(shí)，微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，為使培養(yǎng)基在常規(guī)培養(yǎng)條件下呈固態(tài)，還需要在培養(yǎng)基中添加瓊脂，配制好的培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。

（3）在接種海水時(shí)，常用稀釋涂布平板法，故用到的工具是涂布器，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，在平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，故最后統(tǒng)計(jì)的大腸桿菌菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。在計(jì)算活菌數(shù)目時(shí)，除該實(shí)驗(yàn)中用到的方法外，還可采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。