制備單克隆抗體時(shí)需要使用( 。
A、家兔B、細(xì)胞培養(yǎng)C、小鼠D、顯微注射
分析:單克隆抗體,選出一個(gè)制造一種專一抗體的漿細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),就可得到由單細(xì)胞經(jīng)分裂增殖而形成的細(xì)胞群,即單克。畣慰寺〖(xì)胞將合成針對(duì)一種抗原的抗體,稱為單克隆抗體.經(jīng)過(guò)精子與卵細(xì)胞兩性生殖細(xì)胞結(jié)合的生殖方式叫有性繁殖,不需要經(jīng)過(guò)兩性生殖細(xì)胞的結(jié)合,由母體直接產(chǎn)生新個(gè)體,這種生殖方式叫無(wú)性生殖.單克隆抗體是B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞雜交形成的雜交瘤細(xì)胞,沒(méi)有經(jīng)過(guò)雌雄兩性生殖細(xì)胞的結(jié)合,因此屬于無(wú)性生殖.
解答:解:?jiǎn)慰寺】贵w的制備過(guò)程:1、免疫動(dòng)物 免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過(guò)程. 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射. 抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞.
2、細(xì)胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠,無(wú)菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液. 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇.在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞.
3、選擇性培養(yǎng) 選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基.在HAT培養(yǎng)基中,未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡. 未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡. 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖.
4、雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化 在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞,只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞,因此,必須進(jìn)行篩選和克隆化.通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng).采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法,篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞,并進(jìn)行克隆擴(kuò)增.經(jīng)過(guò)全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后,及時(shí)進(jìn)行凍存.
5、單克隆抗體的大量制備 單克隆抗體的大量制備重要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法.
(1)體內(nèi)誘生法 取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進(jìn)行預(yù)處理.1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞.雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體.約1-2周,可見(jiàn)小鼠腹部膨大.用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體.
(2)體外培養(yǎng)法 將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng).在培養(yǎng)過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體.但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限.近年來(lái),各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),大大提高了抗體的生產(chǎn)量.
可見(jiàn),制備單克隆抗體需要用到B淋巴細(xì)胞、細(xì)胞融合得到的融合細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞(是一種腫瘤細(xì)胞),而沒(méi)用到家兔、顯微注射.
故選:BC.
點(diǎn)評(píng):解答此類題目的關(guān)鍵是理解單克隆抗體的培育過(guò)程和特點(diǎn),較難,需查閱資料回答.
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